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细胞转染转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具,随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。 细胞转染分类 瞬时性转染:外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。 稳定转染:DNA整合到宿主细胞的染色体中或形成附加体。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些「选择性标记反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。 转染原理:目的基因转染细胞后,对目的蛋白的表达及功能的研究可通过检测特定报▆告基因的表达实现。常用的基因报告系统有荧光蛋白报告系统、半乳糖苷酶报告系统、荧光素酶①报告系统。绿色荧光蛋白(GFP)在蓝光或紫外光激发下可发射绿色荧光的特性使得我们在转染细胞后,无需对细胞作特殊的◇处理,只需观察细胞内绿色荧光的产生情况,就可了解转染效率。
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